組織培養(yǎng)-無菌室操作規(guī)程

1. 無菌室室內(nèi)溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%；室內(nèi)應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染；
2. 無菌室應備有工作濃度的消毒液，如75%的酒精，0.1%的新潔爾滅溶液，優(yōu)氯凈，碘伏等等；無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求；
3. 需要帶入無菌室使用的器械，玻璃器皿等一切物品，均應包扎嚴密，并應經(jīng)過適宜的方法滅菌（一般采用高溫高壓滅菌，1.2個大氣壓，121-126℃，30分鐘）；
4. 工作人員進入無菌室前，必須修剪指甲，用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75%的乙醇再次擦拭雙手)，方可進入無菌室進行操作；
手的清潔流程：
（1）取下手上的飾物及手表，調(diào)節(jié)合適的水流，浸濕雙手；
（2）取肥皂或適量肥皂液液涂抹雙手；
（3）按“六部洗手法”順序搓洗雙手：
①掌心對掌心，兩手并攏相互搓擦；
②手心對手背，手指交錯相互搓擦（交換）；
③掌心相對，手指交叉沿指縫相互搓擦；
④用一只手握住另一只手拇指旋轉(zhuǎn)搓擦（交換）；
⑤彎曲一手手指各關節(jié)，在另一只手掌心旋轉(zhuǎn)搓擦（交換）；
⑥指尖在掌心轉(zhuǎn)動搓擦（交換）；
（4）浸濕手的前臂部分（手腕至手肘），取肥皂或適量肥皂液液涂抹前臂，用手掌認真搓擦（交換）；
（5）流水沖洗，腕部略高于肘部，使污水從指尖流至手腕，防止水流入衣袖。
5. 無菌室使用前須用75%的乙醇擦拭超凈工作臺臺面及四周，必須打開無菌室的紫外燈滅菌30分鐘以上，同步開啟臭氧消毒機，輔助進行臭氧消毒，同時打開超凈工作臺紫外燈并開啟風扇按鈕進行吹風。紫外滅菌結束后，關閉紫外燈及臭氧消毒機30分鐘后才能進入無菌室進行操作；
6. 進入超凈工作臺開始工作前，必須先開啟風扇及工作燈，點燃酒精燈，用75%的乙醇認真擦拭雙手，之后才能進行工作；
7. 操作結束后，應及時清理無菌室，進行清掃：
①將使用過的操作工具及廢液缸從超凈工作臺上取出；
②先用碘伏消毒液擦拭超凈工作臺臺面及四周，再用75%的乙醇擦拭一遍，使其恢復成使用前狀態(tài)；
③使用新吉爾滅液或碘伏消毒液進行地板擦拭等清潔工作，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。
④在緩沖間脫下工作服，帽子，口罩，放回原位，離開緩沖間換下鞋子，結束工作。
8. 供試品(培養(yǎng)基、母苗)及包扎好的其他物品在開啟前，應保持外包裝完整，不得在超凈工作臺以外環(huán)境開啟，以防污染。開啟前，用75％的酒精棉球或消毒紗布認真擦拭外表面；
9. *次進行無菌操作前，應做陰性空白對照，以檢查無菌操作、高壓滅菌、培養(yǎng)室的可靠性；后期陸續(xù)操作過程中，若出現(xiàn)大面積污染，則下一批次操作應做陰性空白對照，以便查明污染原因；
10. 工作人員必須在每瓶分苗完畢的培養(yǎng)基瓶外做好標記，標記為“工作臺號+培養(yǎng)基批次”，如工作臺號為01，培養(yǎng)基批次為01，則標記為“0101” ；
11. 工作過程中出現(xiàn)飲水、上廁所等情況暫時離開無菌室后，工作服等應脫下并放置于隔離室衣帽架上，不得穿戴離開隔離室；再次進入前須重復規(guī)程“4” 中的步驟；